Colony overexpression
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작성일 22-10-16 18:43
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⑦ centrifuging하여 pellet을 얻는다. 전사후 단백질의 생성 정도는 시간이 길수록 더 많은 것이라 예상 된다된다. 그러므로 발현되지 않았을 것이다. 이와 비슷한 예로 DNA가 삽입된 플라스미드를 가지고 있는 세균을 찾는 방법 중 하나는 테트라사이클린(tetracycline)과 같은 항생제 저항성 유전자를 클로닝의 제한자리에 놓는 것이다. induction의 기간의 조절한 것으로 보아 시간에 따른 차이가 있어야 할 것 같다. 이 경우 엠피실린 배지에서는 자라나(왜냐하면 엠피실린 저항성 유전자는 그대로 있으므로) 테트라…(drop)
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설명
colonyoverexpression
레포트/공학기술
재조합 DNA를 숙주 세포(대장균)에 삽입(transformation)하여 그것을 다량 발현하는 experiment(실험)의 리포트입니다.
⑤ water bath에서 5분간 boiling
⑥ pellet을 resuspension시킨다..
⑧ loading
4.Result
transformation되지 않은 것은 DNA 발현 조차 불가능 할 것이다. IPTG가 포함되지 않으면
전사되지 않고 유전자 발현이 일어나지 않는다.
Colony overexpression
재조합 DNA를 숙주 세포(대장균)에 삽입(transformation)하여 그것을 다량 발현하는 실험의 리포트입니다. colonyoverexpression , Colony overexpression공학기술레포트 ,
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다.
5.Discussion
(1) transformation된 E coli를 kanamycin이 첨가된 배지에 넣는 이유는 저항 유전자를 지닌, 얻고자 하는 DNA를 선별하기 위해서이다.
3.Methods
① transformation된 E coli를 kanamycin(100 ug/ml)이 첨가된 LB배지에 접종
② 섭씨 37도에서 culture하여 흡광도 600nm에서 OD값이 0.6이 되도록 배양
③ IPTG를 농도가 1mM이 되도록 첨가, 발현 유도
3시간 Induction시킨 것 (조교들이 준비해줌) / test(실험) 시간에 1시간 induction시킨 것
transformation만 된것, trnasformation안된 것
④ supernatant(상층액)을 버리고 pellet(하층에 남은 덩어리)만 남긴 후 sample buffer를 30㎕넣어준다.
induction을 하지 않은 것은 곧, IPTG가 포함되지 않았다는 의미이다. 곧, 1시간 induction시킨 것보다 3시간 시킨 것의 단백질 생성이 많을 것이다.
